M109小鼠肺癌細胞系的特點與培養(yǎng)及應用研究！
小楊 / 2024-04-18 08:55:32
一、背景
M109小鼠肺癌細胞系是一種來源于C57BL/6小鼠的肺癌細胞系，屬于鱗狀細胞癌。該細胞系具有高增殖能力、易形成腫瘤球和轉移等特點，被廣泛應用于肺癌相關研究。
M109小鼠肺癌細胞系的建立始于1980年代，當時研究人員從一例C57BL/6小鼠肺癌組織中分離出腫瘤細胞，并成功建立了該細胞系。目前，M109細胞系已經成為一種常用的肺癌研究模型，被廣泛應用于肺癌的發(fā)生機制、腫瘤生物學特性、藥物篩選和治療等方面。
高增殖能力：M109細胞系具有較快的生長速度和較高的增殖能力，可以在體外持續(xù)傳代。
易形成腫瘤球：M109細胞系在培養(yǎng)過程中容易形成腫瘤球，這是一種由單個腫瘤細胞或少數腫瘤細胞聚集形成的球狀結構。腫瘤球的形成有助于維持腫瘤細胞的干細胞特性和生長信號通路的激活。
轉移能力強：M109細胞系具有較強的轉移能力，可以通過血液或淋巴系統轉移到其他部位形成轉移瘤。
多藥耐藥性：M109細胞系具有多藥耐藥性，即對多種化療藥物產生抗性。這使得該細胞系在藥物篩選和治療研究中具有一定的應用價值。
總之，M109小鼠肺癌細胞系是一種重要的肺癌研究模型，具有高增殖能力、易形成腫瘤球和轉移等特點。通過深入研究該細胞系，可以為肺癌的發(fā)生機制、腫瘤生物學特性、藥物篩選和治療等方面提供重要的實驗依據。
1)復蘇M109小鼠肺癌細胞系細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2)M109小鼠肺癌細胞系細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)M109小鼠肺癌細胞系細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
四、應用
M109小鼠肺癌細胞系可以用于地塞米松增強FRα介導的環(huán)境敏感納米粒的靶向遞送及其抗腫瘤藥效評價：
制備一種pH/還原響應性FA功能化膠束,在殼寡糖(Chitosan oligosaccharide,CSO)上接枝FA、還原敏感膽固醇(Reduced sensitive cholesterol,CET)及pH敏感2’3-二甲基馬來酸酐(DMMA)得到FA修飾的CET-CSO-DMMA(FCSD)。通過超聲法由FCSD材料包載DOX制備pH/還原響應性FA功能化阿霉素(Doxorubicin,DOX)膠束(FCSD/DOX)。
本研究提出一種Dex誘導FRα放大效應及免疫抑制聯合FA功能化阿霉素膠束增加對腫瘤殺傷的序貫療法。在序貫療法中,一方面,Dex選擇性增加M109小鼠肺癌細胞系細胞表而FRα的表達,降低血清免疫球蛋白含量,減弱天然IgM對FCSD/DOX腫瘤靶向性的影響;另一方面,生理條件下FCSD/DOX表面的負電荷在腫瘤細胞外弱酸性(ExtracellularpH,pHc)條件下,電荷翻轉,促進FA功能化DOX膠束的攝取,到達胞內后,胞漿內GSH刺激下CET的二硫鍵斷裂,膠束結構破裂,快速釋放所包載的DOX。
結果表明,序貫療法的抑瘤率為81.01%,與單獨使用FCSD/DOX相比,對M109小鼠肺癌細胞系抑瘤效果明顯增強。因此,我們應重新認識地塞米松和FA功能化NDS聯合對FRα陽性肺癌患者的序貫療法。
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