培養(yǎng)皿和試管在培養(yǎng)基制備過程中有哪些注意事項？
小楊 / 2025-10-09 08:38:02
百歐博偉生物：培養(yǎng)皿和試管的操作直接影響培養(yǎng)基無菌狀態(tài)，核心注意事項圍繞器具預(yù)處理、分裝規(guī)范、滅菌適配性和后續(xù)操作防護(hù)四個維度展開，需針對性區(qū)別處理。
一、器具預(yù)處理：滅菌前的清潔與檢查
無論培養(yǎng)皿還是試管，使用前必須確保無雜質(zhì)、無殘留，避免初始污染。
1、清潔要求
新器具：需先用自來水沖洗，去除表面灰塵和出廠殘留，再用蒸餾水潤洗 1-2 次，晾干后備用。
舊器具：需先清除殘留培養(yǎng)基（可用毛刷蘸洗滌劑刷洗），再用自來水沖凈，最后用蒸餾水潤洗，避免洗滌劑殘留影響培養(yǎng)基成分。
2、完整性檢查
培養(yǎng)皿：檢查皿蓋與皿底是否匹配，邊緣有無破損、裂痕，若有破損需直接丟棄，防止滅菌后密封不嚴(yán)。
試管：檢查管口是否平整、有無裂縫，試管塞（硅膠塞或棉塞）是否完好，棉塞需無霉變、無松動，避免滅菌后脫落或漏菌。
二、分裝操作：適配培養(yǎng)基類型與后續(xù)使用
根據(jù)培養(yǎng)皿和試管的用途差異，分裝時需控制量、方式和無菌防護(hù)。
器具類型 分裝核心要求 具體操作要點
培養(yǎng)皿 用于固體培養(yǎng)基，需保證倒平板后厚度均勻 1.滅菌后的固體培養(yǎng)基（未凝固時）需在超凈臺內(nèi)倒平板，每個直徑 9cm 的培養(yǎng)皿分裝 15-20mL，避免過厚或過薄。2.倒平板時需傾斜培養(yǎng)皿，讓培養(yǎng)基沿皿壁緩慢流入，減少氣泡產(chǎn)生；倒完后輕輕晃動，使培養(yǎng)基均勻覆蓋皿底。3.蓋好皿蓋后，需倒置放置（皿蓋在下、皿底在上）冷卻凝固，防止冷凝水滴落污染培養(yǎng)基表面。
試管 可用于固體（斜面）或液體培養(yǎng)基，需控制高度 1.液體培養(yǎng)基：分裝量不超過試管容積的 1/3，方便后續(xù)振蕩培養(yǎng)或接種操作，避免滅菌時溢出。2.固體斜面培養(yǎng)基：分裝量約為試管容積的 1/4，滅菌后需趁熱傾斜試管，冷卻后形成斜面，增大接種面積。3.試管塞處理：棉塞需塞入試管口 1/3-2/3，松緊適度，既保證透氣（滅菌時排出蒸汽），又能防止外界微生物進(jìn)入；硅膠塞需擰緊，但不可過緊，避免滅菌后難以打開。
三、滅菌適配：確保滅菌徹底且器具完好
1、滅菌方式選擇
均需與培養(yǎng)基一同滅菌（或單獨滅菌后在無菌環(huán)境下分裝），優(yōu)先采用高壓蒸汽滅菌（121℃、103.4kPa，20-30 分鐘）。
培養(yǎng)皿滅菌時，需將皿蓋與皿底配套疊放，用牛皮紙或?qū)Ｓ脺缇?，避免滅菌過程中器具移位或被冷凝水直接沖刷。
2、滅菌后處理
滅菌完成后，需待滅菌鍋內(nèi)壓力降至 0、溫度降至 80℃以下時再取出器具，避免高溫取出導(dǎo)致培養(yǎng)皿炸裂、試管內(nèi)培養(yǎng)基暴沸。
取出的培養(yǎng)皿（未倒平板）和試管需立即放入超凈臺或無菌環(huán)境中冷卻，避免暴露在空氣中吸附灰塵。
四、后續(xù)操作：避免二次污染
1、取用與使用
取用滅菌后的培養(yǎng)皿或試管時，需用無菌鑷子或戴無菌手套操作，避免手直接接觸器具內(nèi)壁或培養(yǎng)基接觸部位。
接種時，培養(yǎng)皿僅需打開一條縫隙（約 1-2cm），接種后立即蓋緊；試管需在酒精燈火焰附近打開塞子，塞子不可放在桌面上，接種后快速塞回，減少管口暴露時間。
2、儲存要求
未使用的無菌培養(yǎng)皿：需用密封袋包裝好，放入 4℃冰箱，儲存時間不超過 1 周，避免吸潮或污染。
制備好的斜面試管：需直立放置在試管架上，4℃冰箱儲存，儲存時間根據(jù)培養(yǎng)基類型而定，一般不超過 1 個月，避免培養(yǎng)基失水或污染。
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