厭氧菌在液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)有何不同？
小楊 / 2026-01-08 09:56:08
厭氧菌在液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)差異顯著，核心源于兩種培養(yǎng)基的氧氣分布特征和菌體附著/擴(kuò)散條件不同，具體對(duì)比和特點(diǎn)如下：
一、生長狀態(tài)核心差異對(duì)比
對(duì)比維度 液體厭氧培養(yǎng)基（如巰基乙酸鈉肉湯、庖肉培養(yǎng)基） 固體厭氧培養(yǎng)基（如厭氧血瓊脂、布氏血瓊脂）
氧氣分布 呈垂直梯度分布：上層為氧化層（含氧），下層為厭氧層（無氧） 需在厭氧罐/厭氧袋中培養(yǎng)，整體處于無氧環(huán)境，無明顯氧梯度
生長區(qū)域 專性厭氧菌僅在下層厭氧區(qū)生長；兼性厭氧菌全層生長 菌落均勻分布在培養(yǎng)基表面或內(nèi)部，無區(qū)域限制
生長形態(tài) 以渾濁、沉淀、菌膜、產(chǎn)氣為主要表現(xiàn)，無典型菌落結(jié)構(gòu) 形成特征性菌落，形態(tài)、大小、顏色、邊緣可作為鑒定依據(jù)
觀察難度 需區(qū)分“厭氧層生長”和“氧化層污染”，易受兼性菌干擾 菌落特征直觀，易與雜菌區(qū)分，便于純化和計(jì)數(shù)
主要用途 菌種增菌、初步判斷厭氧性、觀察代謝產(chǎn)氣現(xiàn)象 菌種分離純化、菌落形態(tài)鑒定、活菌計(jì)數(shù)
二、液體厭氧培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)特點(diǎn)
區(qū)域特異性生長專性厭氧菌只能在下層無色厭氧層生長，不會(huì)擴(kuò)散至上層氧化層；若氧化層出現(xiàn)渾濁，大概率是兼性厭氧菌污染。例如：
產(chǎn)氣莢膜梭菌在庖肉培養(yǎng)基中，僅厭氧層出現(xiàn)渾濁，同時(shí)產(chǎn)生大量氣體，使肉渣分散、培養(yǎng)基瓶塞鼓起。
無固定菌落形態(tài)菌體在液體中自由分散或聚集，表現(xiàn)為三種典型狀態(tài)：
均勻渾濁：菌體均勻分散在培養(yǎng)基中（如多數(shù)擬桿菌）；
菌膜/菌環(huán)生長：部分厭氧菌在厭氧層液面（靠近氧化層的界面）形成薄菌膜或菌環(huán)。
代謝產(chǎn)物易觀察厭氧菌發(fā)酵產(chǎn)生的有機(jī)酸會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基 pH 下降，若添加酸堿指示劑，會(huì)出現(xiàn)明顯顏色變化；產(chǎn)氣類厭氧菌的氣體產(chǎn)生現(xiàn)象（氣泡、瓶塞凸起）比固體培養(yǎng)基更易觀察。
三、固體厭氧培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)特點(diǎn)
需依賴嚴(yán)格無氧環(huán)境固體培養(yǎng)基本身不具備除氧能力，必須配合厭氧罐、厭氧袋或厭氧工作站使用，通過抽氣換氣法（充入 N?、H?、CO?混合氣體）或化學(xué)除氧劑構(gòu)建無氧環(huán)境，否則厭氧菌無法生長。
形成特征性菌落厭氧菌在固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部形成的菌落，是菌種鑒定的重要依據(jù)，常見特征包括：
形態(tài)大?。喝?a href="http://www.family998.com/category/index?keywords=產(chǎn)氣莢膜梭菌&id=0">
產(chǎn)氣莢膜梭菌菌落直徑 2~5mm，圓形、凸起；
脆弱擬桿菌菌落較小，直徑 1~2mm；
溶血特性：在血瓊脂上，產(chǎn)氣莢膜梭菌可形成雙層溶血環(huán)（內(nèi)環(huán)完全溶血，外環(huán)不完全溶血）；
顏色與光澤：部分厭氧菌產(chǎn)生色素，如黑色素?cái)M桿菌菌落呈黑色；多數(shù)厭氧菌菌落為灰白色、半透明；
便于純化和計(jì)數(shù)固體培養(yǎng)基可通過稀釋涂布法或劃線分離法獲得單菌落，進(jìn)而純化菌種；同時(shí)可根據(jù)菌落數(shù)量計(jì)算厭氧菌的活菌濃度（CFU/mL），這是液體培養(yǎng)基無法實(shí)現(xiàn)的功能。
四、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
液體培養(yǎng)基的氧化層渾濁不一定是污染，若接種的是兼性厭氧菌，全層生長屬于正?，F(xiàn)象，需結(jié)合次代培養(yǎng)驗(yàn)證厭氧性。
固體培養(yǎng)基的菌落形態(tài)受培養(yǎng)時(shí)間影響：多數(shù)厭氧菌需培養(yǎng) 48~72h 才能顯現(xiàn)典型特征，培養(yǎng)時(shí)間不足會(huì)導(dǎo)致菌落形態(tài)不清晰。
兩種培養(yǎng)基可搭配使用：液體培養(yǎng)基用于增菌，固體培養(yǎng)基用于分離純化和鑒定，提高實(shí)驗(yàn)效率。
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