金氏B培養(yǎng)基的使用注意事項(xiàng)有哪些？體現(xiàn)在哪些方面？
小楊 / 2026-01-15 09:23:58
金氏B培養(yǎng)基是假單胞菌熒光素檢測(cè)的專用培養(yǎng)基，其使用效果直接受操作細(xì)節(jié)影響，以下是分模塊的核心注意事項(xiàng)，覆蓋配制、滅菌、接種培養(yǎng)、結(jié)果觀察及儲(chǔ)存全流程：
1、培養(yǎng)基配制注意事項(xiàng)
甘油為核心成分，需單獨(dú)精準(zhǔn)添加（10mL/L），不可用其他碳源替代；添加后需充分?jǐn)嚢?，避免局部濃度過(guò)高抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。
干粉溶解時(shí)需加熱煮沸至完全澄清，未溶解的培養(yǎng)基會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)分布不均，影響熒光素生成。
配制后需校準(zhǔn) pH 至 7.2±0.2，pH 過(guò)低會(huì)抑制假單胞菌生長(zhǎng)，pH 過(guò)高則會(huì)降低熒光素產(chǎn)量。
分裝試管制備斜面時(shí)，液體量以試管長(zhǎng)度的 1/3 為宜，滅菌后傾斜放置形成均勻斜面，避免斜面過(guò)厚或過(guò)薄。
2、滅菌操作注意事項(xiàng)
滅菌條件嚴(yán)格控制為 121℃高壓蒸汽滅菌 15 分鐘，滅菌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致甘油碳化、營(yíng)養(yǎng)成分降解，破壞培養(yǎng)基功能；滅菌不徹底則會(huì)引發(fā)雜菌污染。
滅菌后需自然冷卻至 50℃左右再傾倒平板，溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致瓊脂凝固失效，溫度過(guò)低則易使培養(yǎng)基提前凝固，無(wú)法形成平整平板。
避免滅菌后的培養(yǎng)基反復(fù)加熱，反復(fù)高溫會(huì)加速成分破壞，降低檢測(cè)靈敏度。
3、接種與培養(yǎng)注意事項(xiàng)
接種需嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)范，防止雜菌污染；接種時(shí)采用劃線法，保證菌株分散生長(zhǎng)，避免菌落重疊影響熒光觀察。
培養(yǎng)溫度需穩(wěn)定控制在 36±1℃，溫度偏差會(huì)抑制熒光素合成；培養(yǎng)時(shí)間一般為 20-24 小時(shí)，水樣檢測(cè)可延長(zhǎng)至 5 天，但需每日觀察，超過(guò) 5 天可能因菌株老化導(dǎo)致熒光消失。
培養(yǎng)環(huán)境為需氧條件，需保證培養(yǎng)箱內(nèi)空氣流通，厭氧或缺氧環(huán)境會(huì)導(dǎo)致假單胞菌生長(zhǎng)不良。
4、結(jié)果觀察注意事項(xiàng)
熒光觀察需在暗室或避光環(huán)境下進(jìn)行，使用 360±20nm 波長(zhǎng)的紫外燈，環(huán)境光過(guò)強(qiáng)會(huì)掩蓋微弱熒光，導(dǎo)致結(jié)果誤判。
紫外燈照射時(shí)需做好個(gè)人防護(hù)，佩戴護(hù)目鏡、手套，避免紫外線直射眼睛和皮膚，造成灼傷。
觀察時(shí)需區(qū)分熒光素的黃綠色熒光與綠膿菌素的藍(lán)綠色色素，金氏 B 培養(yǎng)基雖抑制綠膿菌素生成，但部分菌株仍可能少量產(chǎn)生，需結(jié)合菌落形態(tài)綜合判斷。
5、儲(chǔ)存注意事項(xiàng)
未滅菌的培養(yǎng)基干粉需密封儲(chǔ)存于陰涼干燥處，避免受潮結(jié)塊；受潮后的干粉溶解性下降，不可使用。
滅菌后的成品培養(yǎng)基（斜面或平板）需在 2-8℃ 冷藏儲(chǔ)存，儲(chǔ)存時(shí)間不超過(guò) 1 周，超過(guò)保質(zhì)期的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)流失，且易滋生雜菌。
儲(chǔ)存過(guò)程中需避免培養(yǎng)基受到光照，光照會(huì)加速熒光素分解，影響后續(xù)檢測(cè)。
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