一、細(xì)胞簡介
人卵巢成纖維細(xì)胞分離自卵巢組織采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
二、產(chǎn)品信息
平臺編號：Bio-131266
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞信息：HOFCs
細(xì)胞名稱：人卵巢成纖維細(xì)胞HOFCs
產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2
細(xì)胞數(shù)量：1x10^6；1x10^6
保存溫度：37℃；-198℃
運(yùn)輸方式：常溫保溫運(yùn)輸；干冰運(yùn)輸
安全等級：1
用途限制：僅供科研2類
培養(yǎng)體系：DMEM高糖培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)溫度：37℃
二氧化碳濃度：5%
簡介：人卵巢成纖維細(xì)胞HOFCs取自女性卵巢正常組織，成纖維樣。
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
三、知識背景
成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來；成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。
剛分離的卵巢成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。
細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。卵巢成纖維細(xì)胞大多分布于卵巢表面，其主要特點(diǎn)和功能：①成纖維細(xì)胞在體外易于培養(yǎng)；②卵巢損傷后，成纖維細(xì)胞能修復(fù)和重塑卵巢；③能在卵巢炎癥時有效控制炎癥擴(kuò)散。
四、應(yīng)用研究
用于人上皮性卵巢癌相關(guān)成纖維細(xì)胞促癌作用的研究：
卵巢癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（carcinoma-associated fibroblasts,CAFs）,作為卵巢癌間質(zhì)微環(huán)境中最主要的細(xì)胞成份之一,對腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用,對腫瘤微環(huán)境內(nèi)的其他非腫瘤細(xì)胞,如細(xì)胞外基質(zhì)、其他間質(zhì)細(xì)胞也產(chǎn)生重要影響,在維持腫瘤微環(huán)境的動態(tài)平衡中發(fā)揮著重要作用。CAFs是一種有著多種來源的細(xì)胞群體,具有廣泛的異質(zhì)性,是各腫瘤研究的熱點(diǎn),人上皮性卵巢癌相關(guān)CAFs也需進(jìn)行深入的研究。
探討上皮性卵巢癌中癌相關(guān)成纖維細(xì)胞與臨床病理特征間的相關(guān)性。
方法：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）為CAFs特異性標(biāo)志物,α-SMA表達(dá)的數(shù)量與強(qiáng)度可代表CAFs的存在數(shù)量,因此采用免疫組化通用型二步法檢測45例非癌卵巢組織中α-SMA表達(dá)和145例上皮性卵巢癌組織中α-SMA和基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的表達(dá),并分析兩者的相關(guān)性及其臨床意義。
結(jié)果：①正常卵巢組織除卵巢間質(zhì)血管外,α-SMA不表達(dá);在良性腫瘤間質(zhì)中少部分陽性表達(dá),且表達(dá)較弱;而在交界性腫瘤中,α-SMA表達(dá)強(qiáng)度介于良性腫瘤和惡性腫瘤之間。而在145例上皮性卵巢癌中,α-SMA均陽性表達(dá),代表陽性的CAFs細(xì)胞在癌組織中的分布有3種方式;且Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌間質(zhì)α-SMA陽性表達(dá)強(qiáng)度明顯高于Ⅰ～Ⅱ期（P=0.016）;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移卵巢癌（P=0.049）。
②正常卵巢組織中MMP-9不表達(dá);而上皮性癌中癌細(xì)胞MMP-9陽性率為95.2%（138/145）。MMP-9在Ⅲ～Ⅳ期組明顯高于Ⅰ～Ⅱ期組（P=0.028）,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組強(qiáng)陽性率高于無轉(zhuǎn)移組（P=0.033）。
③α-SMA在上皮性卵巢癌間質(zhì)強(qiáng)陽性表達(dá)與癌細(xì)胞MMP-9的表達(dá)呈正相關(guān)（p=027）。
五、驗(yàn)收細(xì)胞注意事項(xiàng)
1、收到人卵巢成纖維細(xì)胞HOFCs細(xì)胞，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯(lián)系。
2、收到人卵巢成纖維細(xì)胞HOFCs細(xì)胞，如包裝完好，請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過程中的問題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細(xì)胞會重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請按懸浮細(xì)胞的方法處理。
3、收到人卵巢成纖維細(xì)胞HOFCs細(xì)胞后，請鏡下觀察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請離心收集細(xì)胞，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清。剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。
4、收到人卵巢成纖維細(xì)胞HOFCs細(xì)胞時如無異常情況，請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時之需。
6、24小時后，人卵巢成纖維細(xì)胞HOFCs細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過5分鐘?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細(xì)胞脫落下來，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之完全脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過稀，有些生長較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。
7、貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
特別提醒：原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用，請更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。
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