一、背景
人BURKITT'S淋巴瘤細(xì)胞是由E·Klein和G·Klein于1967年5月從一位16歲黑人男性Burkitt's淋巴瘤患者建立的。Daudi細(xì)胞表面免疫球蛋白陽(yáng)性(sIg+)、Β2-微球蛋白陰性，EBNA陽(yáng)性，并有衣殼抗原VCA；Daudi細(xì)胞攜帶EB病毒。Daudi細(xì)胞是典型的B淋巴母細(xì)胞，廣泛應(yīng)用于白血病發(fā)生機(jī)理的研究。
二、人BURKITT'S淋巴瘤細(xì)胞培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇人BURKITT'S淋巴瘤細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)人BURKITT'S淋巴瘤細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)人BURKITT'S淋巴瘤細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、應(yīng)用
人BURKITT'S淋巴瘤細(xì)胞可以用于DAPT影響B(tài)urkitt's淋巴瘤細(xì)胞株（Raji細(xì)胞）的Notch信號(hào)通路了解Raji細(xì)胞內(nèi)Notch信號(hào)通路激活情況;探索DAPT對(duì)Raji細(xì)胞生存的影響及其對(duì)Raji細(xì)胞Notch分子的作用;探討在Raji細(xì)胞中Notch分子對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響,進(jìn)一步認(rèn)識(shí)Notch和NF-κB信號(hào)通路之間的相互作用。
方法：以正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)為陰性對(duì)照,T-ALL細(xì)胞株Jurkat細(xì)胞為陽(yáng)性對(duì)照,利用Western blot檢測(cè)Raji細(xì)胞Notch1 transmembrane subunit(NTM)蛋白水平,q RT-PCR檢測(cè)Notch1下游靶分子Hes1的轉(zhuǎn)錄水平;不同濃度DAPT作用Raji細(xì)胞后,利用CCK-8法檢測(cè)Raji細(xì)胞增殖情況;DAPT作用Raji細(xì)胞48h后,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期及其細(xì)胞凋亡情況;DAPT作用Raji細(xì)胞48h后,利用q RT-PCR檢測(cè)Notch1、Hes1、c-myc、p65、p50 m RNA的改變,利用Western blot檢測(cè)NTM蛋白水平變化,Rel A(p65)、p50在胞漿和胞核蛋白水平變化。
結(jié)果：
1、Western blot結(jié)果顯示,相比正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PMBC),Raji細(xì)胞可檢測(cè)到較高的NTM蛋白,但二者均低于陽(yáng)性對(duì)照J(rèn)urkat細(xì)胞;q RT-PCR結(jié)果提示,與正常對(duì)照相比,Raji細(xì)胞和Jurkat細(xì)胞內(nèi)表達(dá)高水平的Hes1 m RNA;
2、DAPT作用Raji細(xì)胞后,其增殖受到抑制,且隨著濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng),抑制作用明顯增強(qiáng);
3、DAPT能促進(jìn)Raji細(xì)胞凋亡比例增多;
4、DAPT作用后,Raji細(xì)胞增殖阻滯在S期;
5、DAPT作用Raji細(xì)胞后,Western blot結(jié)果顯示NTM的蛋白水平輕度升高;
6、DAPT作用Raji細(xì)胞后,胞核內(nèi)的p50和p65蛋白水平均增高,c-myc的m RNA水平增高。
結(jié)論：
1、Raji細(xì)胞表達(dá)較高的NTM蛋白和Hes1 m RNA;
2、DAPT可抑制Raji細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡和促使細(xì)胞增殖阻滯于S期;
3、上述現(xiàn)象可能的機(jī)制是DAPT抑制NTM蛋白的酶切從而下調(diào)Hes1 m RNA的表達(dá),同時(shí)增強(qiáng)NF-κB的活性。
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