枝頂孢霉PCR試劑盒的應(yīng)用與影響及研究結(jié)果！
小楊 / 2024-01-10 08:48:13
一、背景
枝頂孢霉PCR試劑盒是一種專(zhuān)門(mén)用于檢測(cè)枝頂孢霉的生物試劑盒。
枝頂孢霉是一種真菌，可引起多種疾病，包括皮炎、角膜炎和尿路感染等。使用PCR試劑盒可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出枝頂孢霉，對(duì)于感染控制和疾病診斷具有重要意義。
枝頂孢霉PCR試劑盒通常由一對(duì)特異性引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs等成分組成。通過(guò)PCR反應(yīng)，可以特異性地?cái)U(kuò)增枝頂孢霉的DNA片段，從而對(duì)其進(jìn)行快速檢測(cè)。使用這種試劑盒的操作過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單，只需將樣品DNA加入到PCR反應(yīng)液中，經(jīng)過(guò)一系列溫度變化和反應(yīng)后，即可得到檢測(cè)結(jié)果。
枝頂孢霉PCR試劑盒具有高靈敏度、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，適用于臨床診斷、食品檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。然而，需要注意的是，PCR技術(shù)雖然具有高靈敏度和特異性，但也可能受到其他因素的干擾，如DNA提取效率、引物設(shè)計(jì)等。因此，在使用PCR試劑盒時(shí)，需要嚴(yán)格按照操作說(shuō)明進(jìn)行，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行仔細(xì)的分析和解釋。
1、樣本采集：從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無(wú)菌容器中。
2、DNA提?。簩⒉杉降臉颖具M(jìn)行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應(yīng)保存在-20°C或更低的溫度下。
3、PCR反應(yīng)體系準(zhǔn)備：根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求，配制PCR反應(yīng)體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。
4、PCR反應(yīng)：將提取的DNA加入到PCR反應(yīng)體系中，進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件和時(shí)間根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行設(shè)置。
5、結(jié)果分析：將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行熒光信號(hào)檢測(cè)，根據(jù)熒光信號(hào)的出現(xiàn)情況判斷是否存在枝頂孢霉的感染。
三、應(yīng)用
以西州蜜25號(hào)甜瓜為試材,分離和鑒定導(dǎo)致鮮切甜瓜腐敗的主要真菌及測(cè)定其致腐能力;通過(guò)短波紫外線照射,了解不同劑量照射對(duì)鮮切甜瓜品質(zhì)的影響并得出最適照射劑量;采用最適劑量UV-C處理,研究其對(duì)鮮切甜瓜的次生代謝及活性氧代謝的影響,從而為UV-C處理對(duì)鮮切甜瓜的保鮮提供理論基礎(chǔ)。
主要研究結(jié)果如下：
(1)使用稀釋平板法、三點(diǎn)法對(duì)鮮切甜瓜中腐敗真菌進(jìn)行分離純化,真菌基因組DNA試劑盒提取其DNA,枝頂孢霉PCR試劑盒PCR擴(kuò)增后進(jìn)行凝膠電泳實(shí)驗(yàn)并測(cè)出DNA序列。通過(guò)形態(tài)學(xué)及枝頂孢霉PCR試劑盒分子生物學(xué)鑒定出鮮切甜瓜主要腐敗真菌有8種,其中霉菌有6種,按其致腐能力由大到小排列,分別為赭曲霉(Aspergillus ochraceus)、球狀枝孢霉(Cladosporium sphaerospermum)、葡萄莖枯病菌(Didymella glomerata)、核生枝頂孢霉(Acremonium sclerotigenum)、褶皺曲霉(Aspergillus rugulosus)、薩氏曲霉(Aspergillus sydowii),酵母有2種,分別為大隱球酵母(Cryptococcus magnus)和粘質(zhì)紅酵母(Rhodotorula mucilaginosa)。
(2)分別使用0、2.2、4.4、6.6 kJ/m2的UV-C照射鮮切甜瓜,在0、4、8、12 d取樣,通過(guò)對(duì)品質(zhì)指標(biāo)的檢測(cè),篩選最適劑量并研究營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。
結(jié)果表明：6.6 kJ/m2的UV-C處理可較好的維持鮮切甜瓜的硬度、可溶性固形物含量、重量,使其保持原有的顏色、降低相對(duì)電導(dǎo)率、在貯藏初期抑制其呼吸強(qiáng)度,減少鮮切甜瓜的菌落總數(shù)及枝頂孢霉PCR試劑盒霉菌酵母數(shù),與空白對(duì)照(Control check,CK)相比貨架期增加2 d。6.6 kJ/m2處理組對(duì)鮮切甜瓜蔗糖、果糖、葡萄糖、三種有機(jī)酸含量無(wú)明顯影響(P>0.05),但在貯藏后期可刺激抗壞血酸含量升高(P<0.05)。
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