SW837人結直腸腺癌上皮細胞的特點及培養(yǎng)操作！
小楊 / 2024-02-16 07:52:10
一、背景
二、該細胞系具有以下特點
來源：SW837細胞系來源于人結腸癌組織，經(jīng)過多次傳代和篩選，形成了一個相對穩(wěn)定的細胞系。
形態(tài)特征：SW837細胞呈多邊形或長條形，大小約為15-30微米，胞質豐富，核大而圓，核仁明顯。
生長特性：SW837細胞生長迅速，傳代周期約為24-48小時，可在含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中穩(wěn)定生長。
侵襲轉移特性：SW837細胞具有較強的侵襲和轉移能力，可通過Transwell小室實驗等方法檢測其侵襲和轉移能力。
其他特性：SW837細胞還具有一定的增殖能力，可用作研究結腸癌細胞增殖相關疾病的模型。
1)復蘇SW837細胞系：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2)SW837細胞系傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)SW837細胞系凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
四、應用
本研究旨在探索MST1調控直腸癌細胞生長的機制。研究MST1對直腸癌細胞凋亡、增殖和遷移的影響是否通過干擾線粒體自噬來實現(xiàn),并進一步探討MST1影響線粒體自噬的分子機制,為靶向治療直腸癌提供新策略。
研究方法：體外實驗:明確MST1對直腸癌細胞系SW 837生物學行為的影響及可能機制。分三部分。
通過Western blots技術檢測直腸癌細胞系SW 837和正常腸粘膜細胞FHC中MST1的表達情況。通過腺病毒轉染技術,使SW 837中MST1水平顯著上升,建立過表達MST1穩(wěn)定細胞系。通過MTT法,TUNEL法、BrdU法和Transwell法分析MST1對直腸癌細胞凋亡、增殖和遷移的影響。通過Western blots技術檢測凋亡、增殖和遷移相關蛋白的表達水平。
通過JC1染色,mPTP開放實驗、Cyt-c免疫熒光以及ATP和ROS水平測定MST1對線粒體功能的影響。通過Western blots技術檢測線粒體自噬相關蛋白,并利用線粒體和溶酶體的免疫熒光共染色分析MST1對線粒體自噬的影響。
利用線粒體自噬激活劑FCCP、JNK抑制劑SP600125(SP)和P53siRNA,通過Western blots技術、免疫熒光等方法來探討MST1與線粒體自噬之間可能的信號通路。
體內實驗：驗證MST1在體內對裸鼠直腸癌細胞移植瘤生長的影響。將對照組SW 837和過表達MST1的SW 837移植到裸鼠腋部皮下,45天后處死,取出移植瘤,測量移植瘤體積和重量。通過Western blots、qRT-PCR方法檢測移植瘤組織中JNK、Caspase 3和Caspase 9的表達情況及Cyclin D和Cyclin E的mRNA水平。同時對移植瘤組織進行HE染色和免疫組化分析。
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