狗腎上皮細胞的培養(yǎng)操作規(guī)程及應用研究！
小楊 / 2024-03-18 08:48:32
一、背景
狗腎上皮細胞是一種狗腎上皮細胞株。這些細胞是從表觀正常的成年雌性可卡犬的腎臟中建立的，并經(jīng)過克隆過程得到。當維持高細胞濃度時，狗腎上皮細胞能夠形成大量的小管。為了形成這些小管，細胞需要每天兩次換液以提供足夠的養(yǎng)分。
與原始細胞株相比，
狗腎上皮細胞的c-AMP檢測水平較低，同時在forskolin刺激下讀出的腺苷環(huán)化酶水平也較低。此外，其跨上皮抗性也比Super Dome和MDCK細胞低。在狗狗的泌尿系統(tǒng)中，上皮細胞的存在是正常的。它們通常存在于狗尿沉渣中，包括少量紅細胞或白細胞以及上皮細胞。此外，年母畜尿中還會含有大量的鱗狀上皮細胞，這些都是正常的生理現(xiàn)象。然而，如果狗狗的泌尿系統(tǒng)受到細菌感染，可能會導致尿道上皮損傷，使上皮細胞脫落，從而可能引發(fā)結(jié)石等問題。
另外，
狗腎上皮細胞還與狗狗的配種健康程度有關。在狗狗的陰道中，未角化的細胞和角化細胞的比例可以反映狗狗的配種狀況。當狗狗接近最佳配種時間時，陰道中角化上皮細胞的比例會增加，而未角化細胞和紅血球的比例則會減少。
1)復蘇狗腎上皮細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2)狗腎上皮細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)狗腎上皮細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、應用
狗腎上皮細胞可以用于豬骨湯胞內(nèi)抗氧化活性評價模型的研究：
由于骨湯對健康的功效為人們廣泛相信,它成為一種長期且廣泛被飲用的湯品?，F(xiàn)有針對骨湯開展的生物學功效研究較少,飲用骨湯的益處缺乏數(shù)據(jù)支持。
通過針對性地構(gòu)建細胞胞內(nèi)抗氧化活性評價模型,確立評價骨湯在細胞內(nèi)抗氧化能力合適的方法，通過該模型比較豬骨湯和清湯(工業(yè)湯)之間以及骨湯不同粒徑組分之間胞內(nèi)抗氧化能力,并結(jié)合骨湯生物化學和膠體化學性質(zhì)對上述抗氧化能力的差異進行闡述,嘗試獲得骨湯在體內(nèi)抗氧化作用機制的梗概,主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
(1)構(gòu)建骨湯的胞內(nèi)抗氧化活性評價模型,通過對不同組織來源的細胞,細胞胞內(nèi)本底自由基和外加氧化劑產(chǎn)生的影響等相關因素進行考察和篩選,最后確定了以上皮細胞系的人結(jié)腸癌細胞(Caco-2)和狗腎上皮細胞作為適合評價骨湯抗氧化活性的細胞模型。
(2)通過比較化學法和細胞內(nèi)抗氧化模型的結(jié)果,骨湯在化學法和胞內(nèi)抗氧化模型存在極大的差異,這說明骨湯在化學水平和細胞水平的抗氧化作用機制可能不同,化學法測定骨湯直接作用于自由基,而在細胞內(nèi)骨湯則更可能是通過作用于胞內(nèi)抗氧化酶系而影響自由基水平。胞內(nèi)抗氧化模型能相對更客觀反映骨湯在體內(nèi)發(fā)揮生物功效的作用。
(3)通過構(gòu)建的胞內(nèi)抗氧化體系對骨湯和清湯的抗氧化活性進行平行的測定,骨湯和清湯表現(xiàn)出不同的抗氧化活性,在上皮細胞Caco-2胞內(nèi)清湯和骨湯的抗氧化能力基本一致,而對狗腎上皮細胞清湯抗氧化能力不及骨湯,化學法測定清湯抗氧化能力強于骨湯,說明骨湯經(jīng)過工業(yè)化處理得到清湯時發(fā)生了構(gòu)造改變,并可能表現(xiàn)為化學水平和細胞水平的抗氧化作用差異。
(4)以胞內(nèi)抗氧化體系對骨湯及其不同粒徑組分的抗氧化活性進行對比測定,結(jié)果以Caco-2胞內(nèi)抗氧化能力衡量的強弱順序為真溶液、顆粒和骨湯原湯,而在狗腎上皮細胞的表現(xiàn)則相反。這兩種上皮細胞代表了體內(nèi)不同組織來源,這可能和骨湯經(jīng)口進入消化道后,其具有生物學效應的成分會依照粒徑大小在不同部位進行轉(zhuǎn)運、吸收和作用有關系。
北京百歐博偉生物技術有限公司擁有對菌種、細胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項目準確到位，都有相關人士進行維護,確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務！也正因為此，北京百歐博偉生物技術有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關系！
下載附件
上一篇：黑皮雞樅菌的生物功能與生活習性及栽培要點！
下一篇：用于熒光標記細胞的：人卵巢癌細胞帶熒光素酶