用于熒光標記細胞的：人卵巢癌細胞帶熒光素酶
小楊 / 2024-03-19 09:24:24
一、細胞介紹
SK-OV-3由G.Trempe和L.J.Old在1973年從卵巢腫瘤病人的腹水分離得到。 此細胞對腫瘤壞死因子和幾種細胞毒性藥物包括白喉毒素、順鉑和阿霉素均耐受。在裸鼠中致瘤，且形成與卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。
該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。
二、產(chǎn)品信息
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：SKOV3/LUC
規(guī)格：T25
特征特性：SK-OV-3由G.Trempe和L.J.Old在1973年從卵巢腫瘤病人的腹水分離得到此細胞對腫瘤壞死因子和幾種細胞毒性藥物包括白喉毒素、順鉑和阿霉素均耐受。在裸鼠中致瘤，且形成與卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。SKOV3/LUC 是SKOV3的穩(wěn)轉株！
培養(yǎng)條件：McCoy's 5A+10%FBS
傳代方法：1：2傳代
凍存條件：無血清細胞凍存液
備注：本庫的細胞系（株）僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的。使用者不得將本庫細胞系（株）轉讓給第三者。
用途：熒光標記細胞
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
三、細胞特性
1）來源：卵巢腺癌，腹水轉移
2）形態(tài)：上皮細胞樣 貼壁生長
3）含量：>1x106 細胞數(shù)
4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途：僅供科研使用。
四、細胞的運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
五、細胞接收后的處理方法
1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
六、細胞培養(yǎng)步驟
1、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備McCoy's 5A培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗1%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
2、細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 800-1000RPM 條件下離心 4-5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至 6ml。24-48h 后換液。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，加 1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按 1：3 到 1:4 比例分到新的含 6ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注：第一次傳代推薦傳代比例為 1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
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